▶茁彩生物通用样本处理方法

2023-03-30 789

血清

血浆

组织匀浆

用预冷的 PBS (0.01mol/L, pH=7.2-7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的 PBS（一般按 1:9 的重量体积比，比如 1g 的组织样品对应 9mL 的 PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在 PBS 中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于 5000×g 离心 5~10 分钟，取上清检测。

培养的细胞

动物细胞：用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液，使细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，收集细胞悬液，4℃低（3000rpm，5min），弃上清，加入一定量PBS（200ul），轻轻吹打混匀，-20℃ 冷冻30 min（液氮冷冻5min），37℃水浴解冻，如此反复3-5次，可形成细胞裂解液（如果反复冻融，破碎效果不好，就采用超声波破碎，破碎条件：用20kHz频率，150W的功率，在冰浴中进行超声波破碎，每破碎2s，间隔3s，反复破碎三次。），以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
植物细胞：用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液，使细胞浓度达到100万/ml左右，置于冰盒上，用超声破碎仪，设置破碎2s，冷却30s的方式，充分破碎细胞，以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
组织的细胞切割标本后，称取1g组织，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），去除上清，再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗涤沉淀的细胞三遍。再用上述的细胞破碎方法破碎细胞。

植物标本

（精提）

称取0.1g（误差±3%以内）新鲜植物组织样本，在液氮中充分研磨；
加入1ml的提取液（80%甲醇）, 置于-20度过夜；
于4度，8000rpm，离心20分钟，取上清；
上清液过C-18固相萃取柱。具体步骤是： 80%甲醇（1ml）平衡柱→上样→收集样品→移开样品后用100%甲醇（5ml）洗柱→100%乙醚（5ml）洗柱→100%甲醇（5ml）洗柱→循环。过柱后的样本真空干燥或氮气吹干，保存备用；
上样前加入pH7.4 PBS缓冲液（1ml定容）。混匀后室温放置30分钟，然后4度离心（8000rpm，15分钟），取上清并暂时保存于4度待用。

（推荐）

用预冷的 PBS (0.01mol/L, pH=7.2-7.4)冲洗组织，去除残留物质（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的 PBS（一般按 1:9 的重量体积比，比如 1g 的组织样品对应 9mL 的 PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在 PBS 中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于 5000×g 离心 5~10 分钟，取上清检测。

尿液

胸腹水

脑脊液

牛奶

蜂蜜

土壤

粪便

咽拭子

加入2ml的pH7.2-7.4左右的PBS，溶解咽拭子头部，摇匀，用镊子取出咽拭子并挤干液体，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清。分装一份待检测，其余冷冻备用，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。如果是测分泌蛋白，直接取上清检测，测试细胞内蛋白，要破碎细胞。

本土壤